犬の前立腺癌（PC）の治療には、現在のところ標準的な治療法は認められていない。このレトロスペクティブな研究では、犬の前立腺癌に対する最終目的の強度変調放射線治療（RT）の結果を評価した。PCの治療のために最終目的の強度変調放射線治療を受けた4施設の18症例を対象に、医療記録のレビューを行った。診断は7/18（39％）の患者で偶発的に行われた。5頭（28％）は診断時に局所領域のリンパ節への転移の証拠があった。17頭の患者は非ステロイド性抗炎症薬を併用していた。15/18頭（83％）の患者は最大許容量（MTD）の化学療法を受けたが、使用した薬剤やプロトコルは様々であった。処方された放射線の総線量は48～54Gy（中央値50Gy）で、1日2.5～2.8Gyずつ照射された。1名の患者は放射線治療の終了前に安楽死した。急性毒性は9名の患者に認められ、グレード1～2の下痢が最も多く認められました。遅発性毒性の疑い（尿道狭窄、尿管狭窄、後肢浮腫）は3名の患者に認められた。RT後の無イベント生存期間（EFS）の中央値は220日、全生存期間の中央値は563日であった。局所進行は7人の患者で発生し、中央値は241日であった。全生存期間の中央値は、偶発的に診断された犬で有意に長かった（581日 vs 症状のある犬で220日、P = 0.042）。EFSは、MTD化学療法を受けた患者で有意に長く（241日対25日、P < 0.001）、転移の証拠を提示した患者（109日）対そうでない患者（388日、P = 0.008）で有意に短かった。これらの結果から、犬のPCの局所制御には、中程度の毒性リスクを伴う確定的な放射線治療が有効であることが示唆された。

犬の骨肉腫（OSA）は、犬に最も多い原発性悪性骨腫瘍であり、転移率が高く、予後が悪いことが知られている。Toceranib phosphate（TOC；Palladia、Zoetis社）は、VEGFR-2、PDGFR、c-Kitを選択的に阻害する動物用チロシンキナーゼ阻害剤であるが、犬のOSAの治療においてその有効性はまだ十分に理解されていない。ここでは、6つのOSA細胞株に対するTOCの機能的効果を、トランスウェル、創傷治癒、コロニー形成の各アッセイで評価した。その後、2つの細胞株（WallおよびPenny）を選択し、犬OSAの同所性異種移植モデルを開発するために、マウスの大腿部内に注射して接種した。各細胞株につき、30匹のマウスを異種移植し、そのうちの半数をコントロールとし、残りの半数にはTOCを40mg/kg体重で20日間投与した。TOCはすべての細胞株の細胞増殖を阻害したが、浸潤と移動の減少はPennyとWallの細胞株でのみ観察された。Penny細胞を移植したマウスにTOCを投与したところ、腫瘍の成長の低下が観察され、PDGFRとc-KitのmRNAが減少していた。免疫組織化学的分析では、TOCを投与したマウスでは、コントロールと比較してKi67染色が有意に減少していた。今回得られた結果から、TOCはin vitroでは細胞の成長をわずかに抑制することができるが、その効果はPenny細胞の異種移植モデルにおいてのみ明らかであり、TOCはアポトーシスマーカーを変化させることなく腫瘍サイズとKi67指数を有意に減少させた。

犬の肥満細胞腫（MCT）の病期診断において、肝および脾の細針吸引（FNA）細胞診を伴うルーチンの腹部超音波検査（US）の重要性については、相反する証拠が存在する。本研究の目的は、厳密に定義された高リスクMCTの犬において、超音波検査と細胞診の所見を相関させ、転帰に与える影響を明らかにすることである。我々の仮説は、高リスクのMCTにおいては、超音波検査では内臓への転移を十分に予測できず、転移が認められない場合と比較して、早期転移は転帰の改善と関連するというものであった。肝臓と脾臓のUSは細胞学的結果と相関しており、転移なし、早期転移、顕在化した転移に分類された。プロスペクティブに登録された82頭の犬のうち、18%が内臓への早期転移、7%が細胞診でのovert metastasisを認めた。内臓への転移を認めた67%がLNへの局所転移を認めた。USは、脾臓に対する感度、特異度、陽性予測値、陰性予測値がそれぞれ67％、68％、21％、94％、肝臓に対する感度、特異度、陽性予測値、陰性予測値がそれぞれ29％、93％、56％、82％と、転移の予測因子としては不十分であった。転移のない犬、早期転移の犬、顕在化した転移の犬の進行までの期間（TTP）の中央値は、それぞれ305日、69日に達しなかった（P < 0.001）。3群の生存期間（MST）の中央値は到達せず、それぞれ322日と81日であった（P < 0.001）。PatnaikまたはKiupelグレードが高いこと、早期の転移、顕在化した転移、十分な局所制御が転帰と有意に関連していた。早期の内臓転移は、転移のない犬に比べて転帰が悪いことと関連していたが、一部の犬では長期的なコントロールが可能であった。

特に高悪性度の肥満細胞腫（MCT）を有する犬について、臨床病期をコントロールした治療成績の発表は少ない。Kiupel高悪性度、臨床病期Iの皮膚型MCTの犬49頭の臨床成績を評価した。生存期間（MST）の中央値は1046日で、1年生存率は79.3％、2年生存率は72.9％であった。試験終了時には24頭が死亡、23頭が生存しており（追跡期間中央値980日）、2頭が追跡不能となった。死因が判明している20頭中14頭でMCT関連死とされた。局所腫瘍再発は9頭（18.4％）、局所リンパ節転移は6頭（12.2％）、新たなMCTは15頭（30.1％）に発症した。腫瘍の位置、組織学的マージンの大きさ、化学療法の使用はMSTに影響しなかったが、有糸分裂数の増加（P = 0.001）と腫瘍径の増加（P = 0.024）は独立して予後を悪くした。手術後にリンパ節転移を起こした6頭の犬は、転移を起こさなかった42頭の犬（1645日）よりもMSTが悪かった（451日）；（P < 0.001）。今回の研究では、臨床病期Iの組織学的にKiupel gradeの高い皮膚MCTを局所手術でコントロールした犬は、特に腫瘍が小さく、分裂数が少ない犬は生存期間が長い可能性があることが示唆された。我々の結果は、予後を決定する際に、病期情報と有糸分裂数の評価が組織学的グレードと同様に有用であることを示唆しており、MCTの犬の生存を予測する際に組織学的グレードだけに頼らないことの重要性を強調している。

リンパ節(LN)転移は、皮膚肥満細胞腫(cMCT)の犬の予後を悪くする因子である。転移性LNの選択的リンパ節切除は予後を改善するが、早期転移性（HN2）LNを有する犬における補助的内科治療の有益性については議論されている。このレトロスペクティブな多施設共同研究の目的は、原発性低悪性度cMCT（Patnaik grade 1-2およびKiupel low-grade）の外科的切除およびHN2 LNのリンパ節切除後のアジュバント医学療法の治療効果を、生存率と再発のパターンを分析することで評価することであった。73匹の犬が対象となった。42頭は補助医療（化学療法および/またはキナーゼ阻害剤）を受け、31頭は受けなかった。内科治療を受けた犬のフォローアップ期間の中央値は619日で、2頭が局所再発、3頭がリンパ節再発、4頭が遠隔再発を経験した。手術のみを受けた犬では、フォローアップ期間の中央値は545日であった。局所再発、結節再発、遠隔再発を経験したものはいなかった。術後補助医療を受けた犬では、進行までの期間が有意に短かった（P = 0.021）。全生存期間についても同様の傾向が見られた（P = 0.056）。今回の研究では、低悪性度cMCTの犬が、原発腫瘍の外科的切除とHN2の局所LNの選択的リンパ節切除を受けた場合、予後が良好であることを示している。これらの犬に補助的な内科治療を行っても、進行や生存の面では何の利益もないようである。

血小板由来成長因子シグナル伝達経路は、犬骨肉腫（cOSA）における増殖刺激および生存促進刺激の誘発および維持に基本的な役割を果たしている。犬骨肉腫（cOSA）やOSA由来の細胞株では、血小板由来成長因子受容体（PDGFR）αとβ、およびそれらの同族リガンドの発現がほとんど常に増加していた。特に、PDGFRβを介したシグナル伝達経路の過剰発現は、間質細胞の動員を促す腫瘍微小環境と、異常な増殖、移動、局所浸潤を誘発する腫瘍細胞などの新生血管形成の両方で認められた。PDGFRβシグナルの病理学的結果の大部分は、発現異常のためである。実際、プロモーターの脱メチル化による癌遺伝子のエピジェネティックな制御異常は、発癌を促す重要なメカニズムとして浮上している。本研究の目的は、PDGFRβプロモーターのメチル化状態を評価し、犬の骨肉腫におけるチロシンキナーゼ受容体の発現調節におけるその役割を明らかにすることである。PDGFRβプロモーターのCpGアイランドは、インシリコと実験を組み合わせたアプローチで同定され、プロモーターのメチル化状態を定量的かつ正確に評価するために、メチル化感受性の高い高分解能融解アッセイに基づいた方法が設定された。そして、ここで紹介した方法を用いて、一連のCOSAのケースでプロモーターのメチル化状態を評価した。COSAは一貫して、しかし様々な形でPDGFRβを発現していた。しかし、プロモーターはほぼ完全に脱メチル化されており、そのメチル化状態は発現レベルとは相関していなかったのである。この発見は、cOSAにおいて転写後の制御機構が働いているのではないかという仮説を支持するものであった。

犬のT細胞リンパ腫(TCL)は、臨床症状、細胞形態、免疫表現型、生物学的挙動が異なる異質な疾患群であるとされている。末梢リンパ節を侵す犬のTCLには、低悪性度のTゾーンリンパ腫(TZL)と生物学的に侵攻性の末梢T細胞リンパ腫(PTCL)がある。TCLの表現型は、表面抗原分子であるCD4とCD8の発現によって分類されます。TCLの大部分はCD4+であり、CD8+やCD4- CD8-の症例は非常に少ない。CD4+ TCLの臨床的特徴については、これまでに説明されています。しかし、あまり一般的ではないTCLの表現型は、予後に関する情報がほとんどなく、特徴がよくわかっていません。このレトロスペクティブな研究では、フローサイトメトリーにより、結節性、非TZL、CD8+またはCD4- CD8- TCLと診断された119頭の犬の、提示された臨床症状、フローサイトメトリー、および予後について記述し、相関させた。診断時に存在していた皮膚病は、CD8+ TCL群でより多く観察された。CD4- CD8- TCL群では、縦隔膜の拡大や高カルシウム血症が多く見られた。CD8+またはCD4- CD8- TCLを持つ犬は、積極的な臨床疾患を持ち、全生存期間（OS）の中央値は、それぞれ198日と145日であった。両群とも、フローサイトメトリーで測定した腫瘍細胞の大きさは、小細胞から大細胞まであり、大細胞はOS期間の短縮と関連していた（OS中央値＝61日）。小細胞に分類された症例は、OSの中央値が257日であった。主要組織適合性複合体（MHC）クラスIIとCD5の発現レベルは、症例によって大きく異なっていたが、この患者群では予後的に有意ではなかった。

パピローマウイルス（PV）の感染は、ネコを含む様々な動物種において上皮性がんの発生と関連している。Felis catus PV type-2 (FcaPV-2)は、そのE6およびE7がん遺伝子の形質転換特性により、ネコ皮膚扁平上皮がん(SCC)の原因の一部と考えられている。しかし、猫の口腔内SCC（FOSCC）の病因にFcaPVがどのように関与しているかはまだ不明である。本研究の目的は、FOSCCサンプルにおけるFcaPV-2の存在と遺伝子発現を評価することであった。PCR法を用いて、分析したFOSCCのうち10/32 (31%)でFcaPV-2のDNAを検出しました。重要なのは、DNA陽性のサンプルのうち7/10（70％）でウイルスのmRNAがRT-PCRによって検出されたことです。特に、FcaPV-2のL1、E2、E6E7遺伝子は、それぞれ5/10(50%)、3/10(33%)、5/10(50%)のサンプルで発現していることがわかった。また、非腫瘍性の口腔内潰瘍性病変（UL）からもウイルスDNAが検出されました（4/11、36％）。qPCRにより、ULとFOSCCの間にウイルス量の差があることが示唆され、特にE6E7を発現しているものでは、統計的に有意ではありませんでした。これらのデータは、FOSCCの一部の発症にFcaPV-2が関与している可能性を示唆しているが、決定的に証明するものではない。さらに、L1とE2の遺伝子発現の結果は、これらの腫瘍に関連するFcaPV-2の感染が生産的である可能性を示している。

「腸管T細胞リンパ腫は犬では一般的であるが、リンパ球の関与を伴う腸炎を伴うため、病理組織学的診断は依然として困難である。確実な鑑別のためには、侵襲的に採取した全層生検が依然として必要である。犬の腸管T細胞リンパ腫における特異的なマイクロRNAの発現パターンの検出は、腸管リンパ腫を良性の炎症と区別するための新たな可能性を提供し、リンパ腫の発生に関するさらなる理解につながる可能性がある。本研究の目的は、犬の腸管T細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性腸炎、および健康な腸管組織から採取したホルマリン固定・パラフィン包埋サンプルの異なるグループにおけるマイクロRNAの発現を特徴づけることであった。1グループ2サンプルの予備テストでは、total RNAを抽出し（RNEasy FFPE Kit, Qiagen）、逆転写し（miScript II RT Kit, Qiagen）、プリアンプを行った（miScript PreAmp PCR Kit, Qiagen）。microRNA PCR Arrayプレート（Qiagen）を用いて、183種類のイヌの成熟したマイクロRNAについてあらかじめ反応させた上で、比較定量PCRを行った。その後、リンパ腫群で発現変化が顕著な12種類のmicroRNAを選択し、各群の全サンプル（n = 8）のmicroRNA発現を、逆転写されたRNAを用いた個別のmicroRNAアッセイ（miScript Primer Assays, Qiagen）を用いて、事前増幅なしで解析しました。その結果、リンパ腫に特異的な発現パターンが明らかになり、腫瘍を抑制するマイクロRNAであるmiR-194、miR-192、miR-141、miR-203の発現が低下し、miR-106a~363クラスターのマイクロRNAを含む発がん性マイクロRNAの発現が上昇していました。さらに、健康な腸管組織とリンパ球形質細胞性腸炎の症例との間では、わずかな発現変化しか検出されなかった。以上のことから、マイクロRNAの発現パターンは、T細胞リンパ腫と健康な組織や良性の炎症性疾患との分離に利用できると結論づけた。

犬の肥満細胞腫（MCT）の遺伝的原因は、一部のMCTで検出されるKIT遺伝子の変異を除いて、一般的には不明である。我々は、全エクソームシーケンスを用いて、犬のMCTにおける変異スペクトルを明らかにした。その結果、ヒトの癌のドライバーとされる10遺伝子を含む87遺伝子に体細胞変異が検出されました。KIT以外にも14の遺伝子が繰り返し変異していた。続いて、追加のMCTサンプルにおいて、選択した50の遺伝子パネルの次世代シーケンシングを行った。このグループでは、最も頻繁に変化した遺伝子はGNB1で、MCTサンプルの30％（n=6/20）でGly116の位置に繰り返し二塩基置換が見られ、1例ではスプライス領域の突然変異を伴うIle80置換が見られました。我々は、追加のMCTサンプルにおける上記のGNB1領域をサンガーシークエンスで解析することで研究を拡張し、GNB1変異の全体的な有病率を17.3％（n = 14/81）と評価したが、これはKITの変化の有病率と同様であった。この結果から、犬のMCTの発症には、皮膚および皮下のMCTの両方において、GNB1変異が関与している可能性があることがわかった。KIT変異とは対照的に、GNB1変異の存在は生存期間にマイナスの影響を及ぼさず、我々のデータは予後を良くする傾向さえ示した。今回の結果がより多くのMCTで確認されれば、GNB1解析による犬のMCTの分子学的検査の拡大は、MCTの分子学的層別化の改善に役立ち、標的治療戦略に有用であると考えられる。