細胞外小胞(EV)は、腫瘍細胞を含むあらゆる種類の細胞から排出される膜に包まれた断片である。EVには、母細胞に由来するさまざまなタンパク質、生体脂質、遺伝物質が含まれているため、腫瘍の診断、疾患の進行、治療の成功のためのバイオマーカーとなる可能性があります。我々は、犬の肥満細胞腫(MCT)が血液中のEV濃度に及ぼす影響を、MCTの組織学的グレード、Ki-67増殖指標、KIT染色パターン、PLT数と関連づけて調べた。MCTを発症した9頭の犬の血液中の平均EV濃度は、健康な8頭の犬の血液中のEV濃度よりもかなり高かった。しかし、悪性腫瘍の組織学的グレード(Patnaik、Kiupel)、KIT染色パターン、Ki-67増殖指数の違いによるMCTを持つ犬の集団におけるEV濃度には、統計的に有意な差はありませんでした。その結果、KIT染色パターンIが統計的に有意に予測に加わったことを除いて、これらの変数は血液中の分離株のEV濃度を統計的に有意に予測しなかった(P>0.05)。この結果から、新生物が細胞膜の形態変化に影響を与え、その結果、小胞化が進み、EV濃度が高くなることが確認された。
リン酸トセラニブ(パラディア)で治療した犬の心基底腫瘍のレトロスペクティブ評価:2011年~2018年
心臓底部腫瘍(HBT)は、老齢の両頭飼いの犬によく発生する。心エコー図による腫瘍の位置と外観に基づいて推定診断がなされる。有効な治療法は、外科手術(可能な場合)または放射線治療に限られる。内科的治療の有用性は現在のところ不明である。このレトロスペクティブな研究の目的は、HBTの犬に対するリン酸トセラニブの有効性と忍容性を評価することであった。組織学的、細胞学的にHBTが確認された、または推定された28頭の犬をレトロスペクティブに評価した。27頭の犬がtoceranib単剤で治療を受けた。1頭はメトロノミック化学療法を併用した併用療法を受けた。この犬は奏効率や生存率の解析には含まれなかった。評価された因子は、臨床症状、血液学的/生化学的パラメータ、および治療に対する反応であった。トセラニブ単剤投与を受けた27頭の犬では、全奏功率は10%であった。全生存期間の中央値は823日(範囲、68~1190日)であった。転移を呈した犬の全奏功率は28.5%で、生存期間の中央値は532日(範囲:77~679日)であった。これは、転移を認めなかった犬の生存期間(中央値)796日と比較して、有意な差はなかった。診断時に臨床症状を呈していた犬のうち、90%がトセラニブの投与開始後に症状が改善し、81%が完全に消失した。毒性は54%の犬に認められ、最も多い毒性は胃腸障害であったが、投与量の減量を必要とすることはまれであった。この結果から、リン酸トセラニブは、進行性または転移性の犬を含む手術不能な犬の心底腫瘍に対して、忍容性が高く効果的な治療法であることが示された。
ダサチニブによるcSRCの阻害は、WntおよびHERシグナルが亢進した犬の乳がん細胞の移動および転移を防ぐ
ヒト上皮成長因子2(HER2)の過剰発現は、積極的な乳腺腫瘍の成長をもたらす。ヒトのHER2+腫瘍の予後は生物学的製剤を用いて大きく改善されているが、ホスファチジル-3-キナーゼ(PI3K)、ルーサス肉腫プロトオンコジーン(cSRC)、ウイングレス型MMTV統合部位ファミリー(Wnt)活性の上昇に起因すると思われる治療抵抗性が大きな問題となっている。最近、12の犬の乳腺細胞株を用いた解析により、HER2/3の過剰発現やphosphatase and tensin homologue (PTEN)の欠失がWntシグナルの上昇と関連していることが示された。Wntシグナルは、ホスファチジル-3-キナーゼ(PI3K)阻害剤には鈍感だが、Src-I1には敏感であることがわかった。私たちは、Wntの活性化は、HER2/3が活性化したcSRCの活性化によって引き起こされると考えた。Wntシグナルに対するHER2/3の役割については、特定の小干渉RNA(siRNA)を用いてHER2/3の発現を抑制することで調べた。次に、上皮成長因子受容体(EGFR)/HER2チロシンキナーゼ阻害剤のWnt活性と移動に対する効果を調べ、関連するシグナル伝達経路の他のチロシンキナーゼ阻害剤(TKI)と比較した。最後に、cSRC阻害剤とPI3K阻害剤の2つのTKIを、ゼブラフィッシュの異種移植モデルで検討した。HER1-3をサイレンシングしても、内在する高いWnt活性は阻害されなかったが、HERキナーゼ阻害剤であるアファチニブはWnt活性の増強を示した。Wnt活性と細胞の生存率および移動を最も強く阻害したのはcSRC阻害剤であり、ゼブラフィッシュ異種移植モデルにおいても細胞の生存率と転移を強く阻害していた。HER2/3の過剰発現やHER2/3によるcSRCの活性化は、Wnt活性の亢進の原因ではない。しかし、cSRCを阻害すると、Wnt活性や細胞の移動・転移が強く抑制された。HER2/3陽性乳がんでHER阻害剤の感受性を回復させるためには、cSRCの活性化とcSRCの阻害のメカニズムを解明するためのさらなる研究が必要である。
犬の乳腺腫瘍のリスク、臨床病理学的特徴および予後におけるE-cadherinの遺伝子変異の影響
E-カドヘリンは、細胞接着分子であり、上皮組織の構造的・機能的完全性の維持を保証するいくつかの細胞プロセスに関与している。E-カドヘリンは乳がんの発生に重要な役割を果たしており、様々な研究により、CDH1遺伝子の変異がヒト乳がんのリスク、進行、生物学的挙動に影響することが示されている。犬のCDH1遺伝子にはいくつかの認識された遺伝子変異があるが、犬の乳腺腫瘍の発生と進行におけるその影響はこれまで評価されていない。本研究では、犬の乳腺腫瘍のリスク、臨床病理学的特徴および臨床転帰におけるCDH1 SNPs rs850805755、rs852280880およびrs852639930の影響を評価することを目的とした。乳腺腫瘍のある雌犬206頭と、乳腺新生物のない雌犬161頭を対象とした症例対照研究を行った。CDH1のSNPであるrs850805755とrs852280880は、乳腺腫瘍の発症リスクの低下と発症時期の遅さに関連していた。さらに、これらのSNPは、組織学的悪性度が低く、核の多形性が低い、小さなサイズの癌の発生と関連していた。SNP rs852639930は、非浸潤性、非浸潤性の成長パターンを持つ小さなサイズの腫瘍の発生と関連していた。本研究のデータは、これらのCDH1遺伝子変異が、犬の乳腺腫瘍において、腫瘍発生の低リスク、発症の遅延、臨床病理学的特徴の低侵襲性と関連し、保護的役割を果たす可能性を示している。
犬の乳腺癌の予後バイオスコアリングシステムの開発とテスト
犬の乳腺癌(CMC)は、多様な生物学的挙動を有する様々な病理組織学的サブタイプを示す。病期、悪性度、サブタイプ、浸潤の有無など、いくつかの個別因子が予後を予測する。しかし、これらの因子がどのように相互作用し、予後に影響を与えるのかはあまり知られていない。本研究の目的は、CMCにおける包括的なバイオスコアリングシステムを開発し、検証することである。2つの前向き研究で治療を受けた127頭のCMCの犬の臨床および病理組織学的データを得た。すべての犬は、標準化された術前の病期分類、治療、および定期的なフォローアップ診察を受けた。すべての腫瘍は、公表されたガイドラインに従って評価、分類、および等級付けされた。この研究では、原発性転移までの期間が主なエンドポイントであった。2つのバイオスコアリングシステムが開発された。多変量スコアリング(MVS)は、伝統的な統計解析に基づいており、多変量解析で有意な因子(腫瘍の大きさと悪性度)のみを最終モデルに残した。洗練された柔軟なスコアリング(RFS)システムは、サブグループ解析の結果に基づいて、柔軟なシステムを開発したものである。いずれのシステムでもバイオスコアの上昇に伴い、予後の進行的な悪化が観察された。MVS:バイオスコアが0から5、10、15、MVSグループ25、30、40のそれぞれ648、149、317の犬では、一次転移のない生存期間(TTM1日)の中央値に達しなかった。同様に、RFSが0、1、2の犬と、バイオスコアが3、4、5の犬では、それぞれ374、407、149でTTM1に達しなかった。しかし、RFSでは転移リスクの高い犬と低い犬がより明確に分かれており、転移リスクに関する総合的な予後判定が優れていることが示唆された。
犬の原発性椎体骨肉腫の緩和的治療のための外科的減圧術(補助療法の有無にかかわらず
椎体骨肉腫(OSA)は犬の最も一般的な原発性椎体腫瘍であるが、これらの腫瘍を外科的に減圧した後の生存期間を調べた研究は限られている。また、これらの患者に放射線療法や化学療法などの補助的な治療を行った場合の効果に関する情報も限られている。本研究の目的は、原発性椎体OSAを有する犬が、緩和的減圧手術単独、および放射線療法や化学療法を併用した場合の生存期間を明らかにすることである。原発性椎体OSAと診断され、減圧手術を受けた顧客の犬22頭の記録を、8つの紹介施設からレトロスペクティブに収集した。生存期間は、手術のみを受けた犬と、放射線療法や化学療法を併用した犬について評価した。手術単独で治療を受けた12頭の生存期間の中央値は42日(範囲:3~1333日)であった。手術と化学療法を行った3頭の犬の生存期間の中央値は82日(範囲:56~305日)であった。手術と放射線治療を受けた犬は1頭のみで、この犬は101日生存した。6頭の犬が手術、放射線治療、化学療法を受けた。これらの犬の生存期間の中央値は261日(範囲:223~653日)であった。術後初期に生存していた全症例の死因は、腫瘍の再成長が確認された、あるいは疑われたことによる安楽死であった。本研究の結果は、椎体OSAの緩和的減圧手術を受けた犬において、決定的な放射線療法(場合によっては化学療法との同時併用)は生存期間を有意に改善することを示唆しており、選択された症例では治療法として選択されるべきである。
犬およびヒトの細胞株における新規白金(II)錯体の活性のin vitro効果
新規の白金誘導体であるトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィンと白金の複合体(Pt-TCEP)の抗がん作用をイヌ(D-17)およびヒト骨肉腫(U2-OS)細胞株で評価した。高濃度(0.625, 1.25, 2.50, 5, 10, 20μM)のPt-TCEPを24時間または72時間インキュベートした後の細胞の生存率をMTTアッセイで調べ、シスプラチンの効果と比較した。Pt-TCEPの長期効果は、Pt-TCEP(2および3μM)に24時間暴露し、その後2週間培養した後、コロニー形成単位アッセイで評価した。細胞周期に対する影響は、Pt-TCEP(3μM)を24時間処理した後に測定した。プロアポトーシス活性は、Pt-TCEP(1.25, 2.50, 5, 10, 20 μM)で24時間処理した後、フローサイトメトリーを用いて調べた。また、アポトーシスに関与する主要なタンパク質の発現を、3または5μMのPt-TCEPを24時間処理した後にウェスタンブロットで測定した。両細胞株において、Pt-TCEPはシスプラチンよりもはるかに効果的に細胞の生存率を低下させた。Pt-TCEPのIC50は、24時間後にD-17で5.93±0.12、U2-OSで3.45±0.14、72時間後にD-17で1.77±0.14、U2-OSで1.53±0.11であった(P < 0.05)。この化合物は、細胞をG2/M期に停止させ、細胞のコロニー形成能を阻害した。Pt-TCEPはカスパーゼ依存性のアポトーシスを誘導した。抗アポトーシス作用のあるBcl-XLタンパク質の発現は、両細胞株ともPt-TCEP処理後に減少した。この結果から、Pt-TCEPの犬およびヒト骨肉腫細胞株に対する抗がん作用が確認された。
虫垂骨肉腫の治療のための四肢救済手術に関連する合併症の管理のエンドポイントとして二次切断を受けた犬の転帰の分析
虫垂骨肉腫(OSA)は犬の筋骨格系の癌の中でも最も多く見られる癌であり、決定的な局所制御を行った後に細胞毒性化学療法を補助することがゴールドスタンダードのアプローチと考えられている。いくつかの研究では、局所制御の手段として外科的な肢の救済が支持されており、肢の切断と比較して同様の結果が得られている。四肢救済の合併症はよく知られているが、合併症の結果として二次切断を受けた犬や、このグループに特有の結果についてはほとんど知られていない。組織学的に確認されたOSAと診断され、骨欠損部を再建するためにインプラントを必要とする手法で外科的に四肢を救済した犬を特定するために、施設内の原発性骨腫瘍登録の犬のレトロスペクティブ分析を行った。合計192頭の犬が確認され、31頭が二次切断を受け、四肢の保存率は84%であった。合計111頭の犬が分析され、31頭の二次切断症例と80頭の対照群が比較のために選ばれました。二次切断の最も一般的な理由は、局所再発(LR)と手術部位感染(SSI)であり、オッズ比はそれぞれ3.6と1.7であった。二次切断を行った犬は、疾患特異的生存期間(ST)の中央値(604日)が対照群(385日)に比べて有意に(P = 0.05)長かった。二次切断後の犬の生存期間は中央値で205日であり、97%が良好な機能的結果を得た。STにプラスの影響を与える有意な独立因子は、二次切断、中程度のSSI、重度のSSI、年齢であった。
犬の高悪性度嗅覚神経芽腫の臨床成績、超微細構造および免疫組織化学的特徴
嗅覚神経芽腫(ONB)は、イヌとヒトの両方において稀な鼻腔内新生物である。ONBは、他の鼻腔内新生物と類似した臨床症状を示し、組織学的および免疫組織化学的特徴が重なることから、鼻腔内新生物の診断と治療を困難にしている。さらに、その稀少性もあって、これらの新生物の治療法に関する報告は不足しています。ヒトでは、初期の剥離手術に続いて放射線治療が行われるのが普通である。ここでは,犬のONBの組織学的,免疫組織化学的,および超微細構造的特徴を報告し,放射線療法を行った症例の臨床経過を報告する。今回検討した9例の犬のONBでは、腫瘍細胞は顕著な神経原線維マトリックスに囲まれて小葉状に配列しており、グレードIII(high grade)のONBと一致する特徴を有していた。新生細胞は、クラスIIIのβチューブリン神経細胞骨格タンパク質であるTuJ-1の免疫組織化学的染色が陽性であり、クロモグラニン、シナプトフィジン、AE1/AE3、MAP2などの他のマーカーの染色も変化していた。最も生存率の高かった症例では、ヒトで使用されている治療法と同様の方法で治療が行われ、デバルキング手術の後に最終的な放射線治療が行われた。本研究では、TuJ-1がONBの有用なマーカーであること、進行した症例であっても放射線治療を行うことで生存期間が延長する可能性があることを明らかにした。
CDK4/6阻害剤であるPalbociclib(PD-0332991)の犬の乳腺腫瘍に対する有効性を評価するin vitro試験を実施
古典的な抗腫瘍剤による犬の乳腺腫瘍(CMT)の治療には問題があり、より良い治療法が求められています。パルボシクリブ(PD-0332991)は、女性の乳がん治療のための革新的で効果的な抗がん剤です。パルボシクリブは、細胞周期機構、ひいては細胞増殖の主要な制御因子であるサイクリン依存性キナーゼ4(CDK4)およびCDK6を阻害します。今回のin vitro試験では、PalbociclibがCMTの治療薬の候補になるかどうかを検討した。この目的のために、内因性のCDK4/6共発現を持つ2つのCMT細胞株であるP114細胞とCF41細胞において、Palbociclibの効果を分析した。P114細胞およびCF41細胞にPalbociclibを投与すると、細胞周期機構におけるCDK4/6の古典的な基質であるリン酸化された網膜芽細胞腫タンパク質(pRb)が、用量および時間に依存して消失した。さらに、Palbociclibによる細胞周期の停止を利用したCMT細胞の処理は、細胞の生存率に影響を与え、コロニー形成を妨げ、細胞の移動活性を低下させた。また、Palbociclibは、P114およびCF41細胞のスフェロイドの成長を阻害した。犬の患者サンプルの免疫組織化学的分析により、CDK6は異なる犬の乳がんタイプで一貫して発現していたが、リン酸化されたpRbの発現パターンは腫瘍の悪性度とは関係なく、個々の腫瘍に特異的であった。以上の結果から、PalbociclibはCMT細胞に対して抗腫瘍効果を有しており、犬の患者はこのCDK4/6阻害剤による治療の潜在的な候補者であると考えられる。